循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）是液體活檢的重要臨床標(biāo)志物，可用于早期癌癥診斷。但它在人體內(nèi)的數(shù)量非常稀少，僅占正常血細(xì)胞數(shù)量的十億分之一。想要找到它，可謂大海撈針。

近年來，中外科學(xué)家都在想辦法從血液中準(zhǔn)確找到循環(huán)腫瘤細(xì)胞。日前，江蘇大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院、新材料研究院研究員劉磊團(tuán)隊(duì)研制出一款多功能仿生柔性膜。這種膜不僅擁有“火眼金睛”和“智慧大腦”，可以準(zhǔn)確“生擒”循環(huán)腫瘤細(xì)胞，還具有媲美人體環(huán)境的仿生機(jī)制，能將循環(huán)腫瘤細(xì)胞毫發(fā)無損地帶回，并在實(shí)驗(yàn)室“釋放”出來用作進(jìn)一步檢測。在目前已開展的乳腺癌患者的血樣檢測中，該膜的檢測數(shù)據(jù)和術(shù)后免疫組織化學(xué)染色結(jié)果高度一致，準(zhǔn)確率達(dá)到100%。同時(shí)，它可以分類捕獲和選擇性分離循環(huán)腫瘤細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)對癌癥的分子分型診斷。相關(guān)研究成果在線發(fā)表于國際期刊《先進(jìn)材料》。

捕獲“掉隊(duì)”的腫瘤細(xì)胞

眾所周知，癌細(xì)胞是一種變異細(xì)胞，有著容易轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的特性，會(huì)經(jīng)由體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到身體其他部位。在轉(zhuǎn)移過程中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞會(huì)從腫瘤組織上脫落進(jìn)入血液。如果能精準(zhǔn)捕獲到循環(huán)腫瘤細(xì)胞，就可比體檢中常規(guī)的腫瘤標(biāo)志物檢測更早一步獲得預(yù)警信號(hào)，知曉人體組織可能存在癌變風(fēng)險(xiǎn)。

“但循環(huán)腫瘤細(xì)胞不僅數(shù)量少，而且非常‘狡猾’。它具有不同的表面標(biāo)記物，會(huì)‘變裝’，一會(huì)兒穿上‘馬甲’，一會(huì)兒披上‘外套’，很難識(shí)別。”劉磊介紹，由于循環(huán)腫瘤細(xì)胞具有稀有性和表面異質(zhì)性的特點(diǎn)，使得循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測面臨極大挑戰(zhàn)。

抓住“狡猾”的循環(huán)腫瘤細(xì)胞，是檢驗(yàn)和鑒別腫瘤的第一步。目前，國際上已有納米磁珠技術(shù)，即利用磁場回收的方式抓取循環(huán)腫瘤細(xì)胞。但這項(xiàng)技術(shù)有一個(gè)嚴(yán)重缺陷：無數(shù)個(gè)磁珠組成的“網(wǎng)”捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞后，細(xì)胞會(huì)“誤食”直徑僅有百納米的磁珠，導(dǎo)致循環(huán)腫瘤細(xì)胞死亡。這樣一來，醫(yī)生就無法進(jìn)一步分析細(xì)胞中攜帶著的寶貴生物學(xué)信息。

2018年，劉磊將研究目光聚焦到循環(huán)腫瘤細(xì)胞的抓取上。他計(jì)劃設(shè)計(jì)一個(gè)智能生物材料界面，集成靶向識(shí)別功能。“這種材料界面就像個(gè)高明的偵探，能夠準(zhǔn)確識(shí)別循環(huán)腫瘤細(xì)胞，伸出‘大手’緊緊地抓住它們。同時(shí)又能夠按需釋放，使循環(huán)腫瘤細(xì)胞從界面上脫落下來，為下游分析提供基礎(chǔ)。”劉磊說。

制出既堅(jiān)固又柔軟的仿生膜

為了實(shí)現(xiàn)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲與分離，劉磊團(tuán)隊(duì)創(chuàng)建了具有動(dòng)態(tài)生物活性的智能生物界面材料體系。“最開始，我們嘗試的是類似于玻璃片的石英片界面。但是石英片又大又脆，無法裁剪，使用極不方便。”論文第一作者、江蘇大學(xué)博士生白蒙起告訴記者，團(tuán)隊(duì)曾制備出一種多功能膜，用于修復(fù)牙釉質(zhì)。受仿生牙釉質(zhì)結(jié)構(gòu)的啟發(fā)，他們將一層二氧化鈦納米管和一層蠶絲蛋白疊加融合，制成了一張柔性膜。

這種柔性膜結(jié)構(gòu)牢固、性能穩(wěn)定、延展性好，拉伸應(yīng)變可接近80%，拉伸強(qiáng)度可達(dá)到十幾個(gè)兆帕。因此，該柔性膜可以被任意裁剪，制成需要的片段進(jìn)行應(yīng)用。與單一的硬基質(zhì)材料相比，在這種柔性膜上可以添加各種功能蛋白，從而為提高捕獲能力打下基礎(chǔ)。同時(shí)，它還可以模擬人體的生理機(jī)制，創(chuàng)造出適合循環(huán)腫瘤細(xì)胞生存的微環(huán)境。

在實(shí)驗(yàn)中，科研人員在柔性膜上添加了靶向肽和牛血清白蛋白。前者可以準(zhǔn)確捕獲并識(shí)別循環(huán)腫瘤細(xì)胞，后者則具有良好的抗污能力，可確保靶向肽正常工作。為了提升柔性膜的捕獲能力，團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了多靶點(diǎn)的界面。與單一靶點(diǎn)界面相比，多靶點(diǎn)界面對溶液中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲能力提高了1倍以上。

“簡單來說，這種膜就是靠分子間作用力，把循環(huán)腫瘤細(xì)胞牢牢抓在界面上。后期需要釋放的時(shí)候，通過糖、多肽等刺激剪斷這種分子間作用力，把循環(huán)腫瘤細(xì)胞釋放出來。”白蒙起說。

智能高效識(shí)別癌癥病理分型

團(tuán)隊(duì)在成功研發(fā)了多功能仿生柔性膜后，首先在乳腺癌領(lǐng)域開展了檢測實(shí)驗(yàn)。乳腺癌是全球女性第一高發(fā)腫瘤。人上皮生長因子受體2（HER2）是迄今為止被研究得比較透徹的乳腺癌基因之一。區(qū)分乳腺癌患者HER2高表達(dá)或低表達(dá)，可以幫助醫(yī)生診斷患者是HER2陽性還是陰性。臨床中，有50%的HER2陽性患者極易發(fā)生腦轉(zhuǎn)移。因此，捕獲具有不同表型的循環(huán)腫瘤細(xì)胞，可為醫(yī)生提供重要的術(shù)后治療依據(jù)。

為此，劉磊團(tuán)隊(duì)將靶向上皮生物標(biāo)志物和HER2蛋白這兩種腫瘤細(xì)胞表面生物標(biāo)志物的特異性多肽固定在膜表面，制備出具有多重動(dòng)態(tài)生物活性表面的二氧化鈦納米管/絲素蛋白柔性膜。劉磊告訴記者，他們已與江蘇省人民醫(yī)院、鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院開展合作，利用該膜對乳腺癌患者的血液樣本進(jìn)行檢測。截至目前，他們已對10例病人的血樣進(jìn)行了檢測，同時(shí)采集3例健康人的血樣開展雙盲實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，多功能仿生柔性膜做出的診斷，與依靠病人組織切片的免疫組織化學(xué)染色數(shù)據(jù)做出的診斷結(jié)果高度一致，檢測準(zhǔn)確率達(dá)100%。江蘇省人民醫(yī)院教授徐建認(rèn)為，這將為今后癌癥患者的預(yù)后和癌癥分子分型診斷提供依據(jù)。

在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，劉磊向記者展示了這種多功能仿生柔性膜如何進(jìn)行檢測操作。科研人員首先將1毫升血液樣本進(jìn)行稀釋，得到4毫升稀釋血液并分成4份；再把膜剪切成0.5厘米見方的大小，分別投入4份稀釋血液中；2小時(shí)后將膜取出，在熒光顯微鏡下，就可以直觀地看到膜上是否有循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

為了進(jìn)一步分辨捕獲的細(xì)胞是否為循環(huán)腫瘤細(xì)胞和HER2高表達(dá)腫瘤細(xì)胞，科研人員用三色免疫法給細(xì)胞染色。利用特異性探針，就可以區(qū)分循環(huán)腫瘤細(xì)胞和白細(xì)胞，以及區(qū)分HER2高表達(dá)和低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞，進(jìn)而判斷患者是否為HER2陽性。

劉磊介紹，目前他們還在與相關(guān)醫(yī)院持續(xù)開展檢測實(shí)驗(yàn)。隨著實(shí)驗(yàn)樣本的增加，團(tuán)隊(duì)將在同樣界面上實(shí)現(xiàn)對不同類型乳腺癌病理分型的全面快速檢測和判斷。

“這種膜不僅可以檢測腫瘤，還可以用于外傷給藥。通過特異性形式把藥物添加到界面上，在病理微環(huán)境的刺激下，就能實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)釋放藥物，達(dá)到治療效果。”劉磊說，通過和臨床的進(jìn)一步結(jié)合，這種多功能仿生柔性膜還可以繼續(xù)優(yōu)化并拓展實(shí)用性，為患者提供無損傷、快速便捷的診療方案。